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高速逆流色谱法对刺五加有效成分刺五加苷E的分离制备

放大字体??缩小字体 发布日期:2017-10-30??来源:中国色全部ag平台下载|优惠网??作者:[db:作者]??浏览次数:1073
核心提示:  高速逆流色谱法(HSCCC)是20世纪80年代初期发展起来的一种无需使用任何固态支持介质的液液分配色谱分离技术样品的各组分是根据其在两相中的分配系数不同被分离开的。由于不使用固态支持介质,避免了因

  高速逆流色谱法(HSCCC)是20世纪80年代初期发展起来的一种无需使用任何固态支持介质的液液分配色谱分离技术样品的各组分是根据其在两相中的分配系数不同被分离开的。由于不使用固态支持介质,避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活变性等。高速逆流色谱法已广泛应用于天然产物有效成分的分离。

  刺五加提取物是从五加科植物刺五加的干燥根及根茎中提取的有效成分。刺五加的主要成分为苷类,含有刺五加苷A、紫丁香苷(刺五加苷B)、刺五加苷B1、紫丁香树脂苷(刺五加苷E)芝麻脂素等12.苷类又是刺五加的活性中心,具有药理作用。苷类又称配糖体,生物化学中称苷,是糖或糖的衍生物如氨基糖、糖醛酸等与另一非糖物质(称色谱溶剂系统,从刺五加中分离出刺五加苷E,并为以后的苷类等极性化合物的高速逆流色谱法分离提供了技术依据。

  1实验部分1.1仪器HSCCC仪器系统:多层螺旋管高速逆流色谱仪,配8823A-UV紫外检测仪(北京市新技术应用研究所)、NS-1007型数控往复塞计量泵(北京圣谊通技术责任有限公司)YOKOGAWA3057型记录仪(四川仪表厂)进样器(天津高科技公司)。分析型HSCCC仪(GS20型)容积40mL.半制备型HSCCC仪(GS10型)容积极管阵列检测器、SCL-10AVP系统控制器、CTO-10AS柱温箱和DGU-12脱气机。

  RE90型旋转蒸发仪。FC-95自动馏分收集器。1.材料与试剂刺五加粗品由国家中药工程中心提供,实验中所用的氯仿、甲醇、异丙醇均为分析纯,乙腈为色谱纯,购于北京市化学试剂公司。

  1.3溶剂体系选择分析型高速逆流色谱仪是进行小量样品快速分离的仪器,它最大的优点是分离时间短和溶剂用量较少。高速逆流色谱分离成败的关键在于是否能够选择合适的两相溶剂系统。过去选择可用的溶剂体系的手段是测定样品的分配系数法、纸色谱模拟法、高效液相色谱法等。这些方法对于逆流色谱而言,都只是间接的比照法。只有分析型高速逆流色谱法才能最直接地以其快速、溶剂消耗少等优点为制备型高速逆流色谱的溶剂系统选择提供最有效的依据。依据经验,在实验过程中选择了两大类溶剂系统,并调整了其体积比:a乙酸乙酯-水(1:1);b乙酸乙酯-甲醇-水(:1:5);c.乙酸乙酯-甲醇-水(0:1:10);d.乙酸乙酯-甲醇-水(7:5);e.乙酸乙蔽异丙醇-水(6:1:5);。氯仿-甲醇-异丙醇-水(6:6:1:4);g.氯仿-甲醇-异丙醇-水(:6:1:4)。

  先将色谱柱充满上相作为固定相,调整主机转速为1 800r/min,然后以1.0mL/min的流速泵入下相作为流动相,待流动相从柱出口流出,两相在柱中达到平衡状态时,通过进样阀进样,流出液用紫外检测器在254nm处进行检测,同时用记录仪记录色谱图,根据色谱图用组分收集器收集流出液。实验结果表明:采用a洗脱出4个峰,液相色谱分析后4分析后4号峰纯度达到92%,但得率低;而采用cde,只有两个峰被洗脱,液相色谱分析后纯度低;采用f洗脱峰峰形与g相似,但分辨率低于后者,因此最优化的两相溶剂系统为g. 1.4刺五加粗品的分离采用半制备型高速逆流色谱仪(聚四氟乙烯柱)进行分离制备。首先将氯仿、甲醇、异丙醇、水以5:64=4的体积比置于分液漏斗中,摇匀后静置分层。

  待平衡一段时间后,将上相和下相分开,取上相作为固定相,下相作为流动相。称取151mg刺五加粗样溶解于20mL流动相中,待用。

  进样前,先用固定相注满整个色谱柱,调整主机转速为800r/min,以20mL/min的流速将流动相泵入柱内;待整个体系建立动态平衡后,由进样阀(20mL)进样;然后根据紫外谱图,接收目标成分。

  检测波长254nm,记录仪灵敏度范围为1A,量程100mV,纸速2cm/h.收集到的各峰样品用RE90型旋转蒸发仪蒸干有机相,水相用冷冻干燥仪冷干。

  采用高效液相色谱检测其纯度,参照建立HPLC分析条件。

  5液相色谱条件8%线性增长至16%检测波长254nm;流速1.0mL/min;柱温30%进样量20ML;样品采用初始时的流动相溶解。

  2结果与讨论个组分的纯度低;采用b,洗脱出4个峰,液相色谱“in;254nm魏芸等:高速逆流色谱法对刺五加有效成分刺五加苷E的分离制备检测纯度,其中2,7号峰纯度较高,6号峰经质谱分析确定是刺五加苷E,纯度达到98%,为所得产品中纯度最高的成分之一,200mg粗品可得30mg刺五加苷E其产量与其他洗脱物相比是最高的,为最终产物。刺五加粗品及所得刺五加苷E的HPLC色谱图见。

  为刺五加苷E在3种保留时间下的紫外扫描图。从可看出保留时间为12.90min,13.90 60min时刺五加苷E的紫外扫描图完全一致。以12.65min时的紫外扫描图为标准,分别将51min时的紫外扫描图与之相比1和0.9991,说明刺五加苷E纯度高,柱后拖尾是由液相色谱柱本身柱效差引起的。

  从刺五加粗品的HPLC谱图也可看出拖尾现象。

  刺五加粗样和刺五加苷E(b)的高效液相色谱种保留时间下刺五加苷E的紫外扫描图

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